在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，人們常常關(guān)注細(xì)菌和真菌的污染，認(rèn)為它們是細(xì)胞培養(yǎng)的主要干擾因素。但其實(shí)，更嚴(yán)重的是支原體 的感染，它的發(fā)生率非常高，而且不易被發(fā)現(xiàn)。本文締一生物/締一生物為您分析污染細(xì)胞的支原體從哪里來(lái)。

不僅普通光鏡下無(wú)法發(fā)現(xiàn)支原體，而且培養(yǎng)基也不容易變色。但支原體對(duì)細(xì)胞的各種干擾卻是不容忽視的。它不僅導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不佳，生長(zhǎng)速度慢，而且會(huì)使細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA及蛋白表達(dá)發(fā)生改變，嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，在預(yù)防和治療支原體污染之前，有必要去了解細(xì)胞被支原體污染的可能途徑。

　　支原體可以通過(guò)頂部的細(xì)胞器特異性和宿主細(xì)胞結(jié)合。這些頂部的細(xì)胞器含有高濃度的粘附蛋白，可粘附到真核細(xì)胞并穿入到細(xì)胞內(nèi)部。支原體缺乏細(xì)胞壁，它們的胞膜可和宿主的細(xì)胞膜融合并交換其胞膜和胞漿成分。

　　支原體污染的頻率和污染來(lái)源

　　細(xì)胞培養(yǎng)中有幾種支原體污染與人、牛和豬有關(guān)。實(shí)驗(yàn)室的工作人員是口腔支原體、發(fā)酵支原體和人型支原體的主要來(lái)源。這三種支原體占細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的一半以上，它們主要存在于人的口咽部。精氨酸支原體和無(wú)膽甾原體是另兩類(lèi)細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體，它們來(lái)自胎牛血清和新生牛血清。胰酶如果是豬來(lái)源的，那么也可能存在豬鼻支原體。圖1顯示了支原體的常見(jiàn)宿主以及污染細(xì)胞的發(fā)生率。

　　圖1：在細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)的不同種類(lèi)的支原體頻率

　　支原體在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的擴(kuò)散來(lái)源

　　McGarrity設(shè)計(jì)了一個(gè)模型，來(lái)發(fā)現(xiàn)支原體是如何在超凈臺(tái)里的細(xì)胞傳代過(guò)程中發(fā)生傳播的。他先故意用支原體感染細(xì)胞。在超凈臺(tái)中，用胰蛋白酶消化該污染的細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，活的支原體可從細(xì)胞培養(yǎng)瓶外的細(xì)胞計(jì)數(shù)板、移液器、廢棄盤(pán)中被技術(shù)員分離出來(lái)。即使過(guò)了四至六天，活的支原體仍然可以存在于超凈臺(tái)表面，可被成功恢復(fù)。在超凈臺(tái)里，傳代完被支原體污染的細(xì)胞后，再傳代干凈的不含支原體的細(xì)胞，結(jié)果仍然在6周后被檢測(cè)出支原體陽(yáng)性。這些結(jié)果表明，支原體的傳播是多么的快速和容易！它也警告我們，要zui大限度的避免支原體的污染，因?yàn)橐黄考?xì)胞發(fā)生污染，就會(huì)帶來(lái)支原體傳播的可能。

　　未真正消毒的耗材、培養(yǎng)基和溶液

　　不恰當(dāng)?shù)南緦?dǎo)致污染的另一個(gè)原因。高壓鍋或干熱烤箱中堆積太多的物品造成加熱不均，使一小部分耗材未得到消毒。滅菌循環(huán)時(shí)間過(guò)短是另一個(gè)消毒上犯的錯(cuò)誤，特別是對(duì)于超過(guò)500ml的液體，或者是包含固體成分的溶液，或膠體物質(zhì)如瓊脂、淀粉等。為了實(shí)現(xiàn)無(wú)菌，滅菌材料的尺寸、質(zhì)量、性質(zhì)和體積必須始終考慮。

　　在無(wú)菌和無(wú)昆蟲(chóng)區(qū)域存放消毒好的物品，使防止再次污染的前提。良好的無(wú)菌操作也是至關(guān)重要的。

　　實(shí)驗(yàn)室人員

　　在因人導(dǎo)致的細(xì)胞支原體污染中，口腔支原體發(fā)生率zui高，它主要存在人的口咽部。發(fā)酵支原體和唾液支原體也在污染的細(xì)胞培養(yǎng)液中被檢測(cè)出來(lái)，不過(guò)發(fā)生率更低。

　　被支原體污染的細(xì)胞

　　實(shí)驗(yàn)室內(nèi)細(xì)胞支原體的相互傳染，有必要對(duì)于從外源獲得的新的細(xì)胞系進(jìn)行支原體檢測(cè)。一瓶細(xì)胞中的單個(gè)支原體的存在足以威脅到其他培養(yǎng)的細(xì)胞。支原體的污染能通過(guò)細(xì)胞操作產(chǎn)生的氣溶膠或液滴傳播。所以，應(yīng)一次只操作一種細(xì)胞，為每種細(xì)胞系配置單獨(dú)的培養(yǎng)基和試劑，這能避免支原體的污染。

　　細(xì)胞培養(yǎng)的正確操作和對(duì)新培養(yǎng)的細(xì)胞定期檢查，可以減少支原體污染的機(jī)會(huì)。

綜上所述，您是不是已經(jīng)對(duì)污染細(xì)胞的支原體從哪里來(lái)，有所了解。如果還有其他疑問(wèn)，請(qǐng)咨詢(xún)締一生物/締一生物資深專(zhuān)家。